新辅助化疗（NAC）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）的治疗中愈发重要，但其对口腔鳞状细胞癌免疫表型的影响尚不明确。本研究旨在评估新辅助化疗对口腔鳞状细胞癌患者的作用，并明确新辅助化疗前后肿瘤标本中免疫检查点及肿瘤相关免疫细胞的特征。
2025年10月，山东第一医科大学附属省立医院口腔颌面外科团队在Journal of Cranio-Maxillo-Facial Surgery发表题为” Effect of neoadjuvant chemotherapy on the clinical outcomes and immune microenvironment in oral squamous cell carcinoma”文章。
研究比较了新辅助化疗（16 例）与单纯手术（18 例）在口腔鳞状细胞癌治疗中的效果，采用多重免疫荧光技术对 12 例口腔鳞状细胞癌患者（6 例接受新辅助化疗，6 例未接受）的肿瘤样本进行免疫标志物分析。
展开剩余75%研究使用两组抗体组合对相关标志物进行定量检测，包括 FOXP3、CD4、CD8、CD68、PD-1、PD-L1、CTLA-4、CD66b、CD16、CD19、Caspase-3及GSDMD。
结果显示，新辅助化疗组与对照组的总生存期无显著差异；新辅助化疗未对患者造成不良影响，且使 8 例患者实现肿瘤降期。接受新辅助化疗的患者中，CD8⁺PD-L1⁺细胞表达显著升高（P<0.05），PD-1⁺、PD-L1⁺、CTLA-4⁺及半胱天冬酶⁺（Caspase⁺）细胞密度更高；肿瘤组织中 CD8⁺PD-1⁺、CD8⁺PD-L1⁺及 CD68⁺PD-L1⁺细胞密度亦有所增加，而 CD68⁺、CD16⁺、CD19⁺、CD66b⁺及 GSDMD⁺细胞密度则降低。
综上，新辅助化疗可改善临床结局，在不产生不良影响的前提下降低肿瘤临床分期，为更根治性的手术创造条件。接受新辅助化疗的口腔鳞状细胞癌患者体内 CD8⁺PD-L1⁺细胞增多，提示新辅助化疗可能增强免疫应答通路，这也凸显了进一步研究化疗与免疫治疗联合应用于口腔鳞状细胞癌的必要性。
实验部分
Tissue Cytometry技术主要用于肿瘤免疫微环境相关的细胞识别、组织分区及蛋白表达量化分析，是解析新辅助化疗（NAC）对口腔鳞状细胞癌（OSCC）免疫微环境影响的核心工具：
1. 细胞与组织类型的精准识别与分类
通过多重免疫荧光（mIF）技术标记免疫相关标志物：
Panel 1：CD8，PD1，PDL1，CD4，CD68，FOCPE3，DAPI
Panel 2：CD66b，Caspase 3，CD16，CD19，GSDMD，CTLA4，DAPI
细胞分割：通过算法对组织切片中“细胞核周围区域”的所有细胞进行精准分割，确保单个细胞被独立识别，避免重叠或遗漏，为后续定量分析奠定基础；
组织识别：结合人工训练与机器自学习方法，将组织划分为肿瘤区（tumor）和间质区（stroma），实现对不同微环境区域中免疫细胞分布的差异化分析；
细胞表型鉴定：根据不同标志物的荧光信号，辅助识别并归类特定免疫细胞亚群，确保后续分析的细胞类型准确性。
2. 免疫标志物表达的定量分析
研究需比较NAC治疗前后、NAC组与非NAC组的免疫细胞密度及蛋白表达差异：
荧光强度阈值设定：计算每种检测标志物（如PD-L1、CTLA-4）的“平均荧光强度阈值”，将荧光信号超过该阈值且表达模式符合预期的细胞定义为“阳性细胞”，避免主观判断误差；
密度与比例计算：在选定的×200倍视野中，统计肿瘤巢、肿瘤间质及全区域内“阳性细胞占所有有核细胞的百分比，并计算单位面积内的细胞密度，为后续统计分析提供标准化数据；
多光谱图像整合：将同一张切片的多个原始多光谱图像（对应不同标志物）整合到统一分析流程中，实现对“共表达标志物细胞”的精准量化——这是研究中发现“NAC后CD8⁺PD-L1⁺细胞显著增加”的关键技术支撑。
Figure 2 NAC 治疗前后 OSCC 标本的多重免疫荧光成像图
Figure 3 ：NAC 治疗前后总免疫标志物水平的对比图
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